Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Несколько подозрительных колоний переносят по отдельности на агаризо-ванную среду М в пробирках с использованием поверхностной и глубинной инокуляции. Присутствие сальмонелл предварительно подтверждается, если имеется изменение окраски из красной в желтую и, как правило, газообразование в случае глубинной, но не поверхностной инокуляции. При этом в агаре может образовываться сероводород. Окончательный вывод делают на основе соответствующих биохимических и серологических испытаний. Продукт выдерживает испытание, если культура описанного типа не обнаруживается или подтверждающие биохимические и серологические испытания дают отрицательный результат.
# 1 мл обогащенной культуры на среде № 3 вносят в пробирку с 10 мл среды № 12 (селенитовая среда) и инкубируют при 30 - 35°С в течение 16-18 часов. Делают пересев петлей на среду № 5 (висмут-сульфит агар) и инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 24 - 48 часов. На среде № 5 Salmonella образует, как правило, типичные черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом участок среды под колонией прокрашивается в черный цвет. Подозрительные на принадлежность к Salmonella колонии микроскопируют и, при обнаружении в мазках грамотрицательных палочек, отсевают на среду №13 (трехсахарный агар с солями железа), нанося небольшое количество культуры петлей сначала на скошенную часть агара, а потом уколом в столбик. Параллельно ставят тест на цитохромоксидазу, используя чистую культуру с плотной среды № 1. Через 18-24 часа инкубации при 30 - 350С отмечают изменение цвета среды из красного в желтый только в столбике питательной среды. Почернение среды свидетельствует об образовании сероводорода.
Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидаза, не ферментирующие сахарозу и лактозу и выделяющие сероводород, считают, что лекарственное средство контаминировано Salmonella.
Pseudomonas aeruginosa
Испытуемый продукт готовят в соответствии с указаниями общего раздела
2.6.12. 10 мл образца или количество, соответствующее 1 г или 1 мл продукта, помещают в 100 мл питательного бульона А, гомогенизируют и инкубируют при 35-370С в течение 18-48 часов. Пересевают на чашки с агаризованной средой N и инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Если рост микроорганизмов не наблюдается, то продукт выдерживает испытание. Если имеется рост колоний грамотрицательных палочек, выполняют пересев некоторого количества различающихся по морфологическим признакам изолированных колоний на питательный бульон А и инкубируют при 41-430С в течение 18-24 часов. Продукт выдерживает испытание, если при 41-430С роста не происходит.
При испытании трансдермальных пластырей 50 мл образца А пропускают через стерильный мембранный фильтр в соответствии с указаниями общего раздела 2.6.12, помещают мембранный фильтр в 100 мл жидкой среды А и инкубируют при температуре 35-370С в течение 18-48 часов. После окончания периода инкубации пересевают на поверхность агаризованной среды N.
# Образец в количестве 10 г (мл) вносят в 100 мл питательной среды № 8, перемешивают и инкубируют при температуре 30 - 35°С в течение 24 - 48 часов. Делают пересев на чашку с плотной питательной средой №9 и инкубируют при температуре 30-350С от 18 до 48 часов. Рост зеленоватых, как правило, флюоресцирующих колоний, голубых в ультрафиолетовом свете (что свидетельствует о наличии пигмента пиоцианина) указывает на возможность загрязнения лекарственного средства Pseudomonas aeruginosa. В этом случае подозрительные колонии пересевают на скошенную плотную среду №1, инкубируют при температуре 30-350С в течение 18-24 часов. Выросшие колонии микроскопируют и, при выявлении грамотрицательных палочек, проводят тест на наличие фермента цитохро-моксидаза. Если в образце обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию и образуют синезеленый пигмент, лекарственное средство контаминировано Pseudomonas aeruginosa.
Staphylococcus aureus
Испытуемый продукт готовят в соответствии с указаниями общего раздела
2.6.12. 10 мл образца или количество, соответствующее 1 г или 1 мл продукта, помещают в 100 мл питательного бульона А, гомогенизируют и инкубируют при 35-370С в течение 18-48 часов. Пересевают на чашку с агаризованной средой О и инкубируют при 35-370С в течение 18-72 часов. Наличие черных колоний грампо-ложительных кокков, окруженных прозрачными зонами, свидетельствует о присутствии S. aureus. Подтверждение может быть получено путем проведения соответствующих биохимических тестов, например, на коагулазу и дезоксирибонуклеазу. Продукт выдерживает испытание, если культура описанного типа на агаризован-ной среде О не обнаруживается или подтверждающие биохимические испытания дают отрицательный результат.
При испытании трансдермальных пластырей 50 мл образца А пропускают через стерильный мембранный фильтр в соответствии с указаниями общего раздела 2.6.12, помещают мембранный фильтр в 100 мл жидкой среды А и инкубируют при температуре 35-370С в течение 18-48 часов. После окончании периода инкубации пересевают на поверхность агаризованной среды О.
